孤兒彼得帕克（安德魯加菲爾德 飾）從小寄居在梅姨與班叔家中，內向害羞的他在校總是被欺負的對象，但自從帕克愛上學校的風雲人物史黛西（艾瑪史東 飾）後，純純的初戀為他的生命帶來一點信心。帕克一直尋找著雙親離奇失蹤的線索，靠著父親唯一的遺物，他找到父親當年的夥伴康納博士（瑞斯伊凡斯 飾）。沒想到某天帕克意外遭基因改造的蜘蛛咬傷，竟然出現異於常人的能力，開啟了他成為神秘英雄的新生活。神秘蜘蛛人的出現引發媒體與社會討論撻伐，帕克必須隱藏身分。然而，當大反派蜥蜴人的為非作歹越來越囂張，帕克該如何面對外界對蜘蛛人身份與能力的質疑，不顧一切挺身而出，拯救紐約市民免於災難？