本片根據《萬惡城市》作者法蘭克米勒的同名史詩繪本小說改編，重新詮釋西元前四百多年前波希戰爭中的一場色摩比利山隘口戰役，李奧尼達王（傑哈德巴特勒 飾）率300斯巴達士兵，以寡擊眾對抗波斯國王薛西斯一世與他所率領的波斯百萬大軍；面對如此難以克服的對手，他們的英勇與犧牲激勵了所有希臘人對抗波斯敵軍，為當時的民主體系保留了最後防線。

《 300 壯士：斯巴達的逆襲 》描述歷史上最慘烈的戰役之一：波斯希臘溫泉關之役。在西元前480年，強盛的波斯帝國由國王索斯御駕親征，率領大軍進攻希臘。當時的希臘是採城邦制政體，大城斯巴達向來駐守著最精銳的希臘勇士，以驍勇善戰聞名，於是斯巴達國王從中挑選了300名勇士鎮守 Thermopylae 一地，力克波斯大軍。兩軍狹路相逢交戰於一狹隘險峻的山谷-溫泉關，寡不敵眾的斯巴達300壯士部隊對比於成千上萬的波斯大軍，形同自殺部隊，他們被授與的最大的任務是犧牲自己，爭取時間以讓其他的希臘軍隊得以部署整頓迎戰波斯的入侵。然而英勇的斯巴達勇士人少志氣卻高，不甘心於僅僅是拖延時間的指令，各個置生死於度外，以守衛自己的家園，消滅最多的波斯大軍為己任。300名斯巴達壯士最後全數陣亡，但也讓波斯大軍付出了兩萬兵力的慘烈代價，他們的英勇行為最終感召了希臘全國上下民心士氣，團結一心將波斯大軍殲滅。